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XBridge色譜柱使用維護十點心得

更新時間:2018-11-18      點擊次數(shù):2105
  XBridge色譜柱的正確使用方法和細致的維護工作很重要,使用和維護不當會降低柱效、縮短壽命甚至損壞。在反相色譜操作過程中,需要注意下列問題,以維護XBridge色譜柱的性和性。
  一、避免壓力和溫度的急劇變化
  溫度突變或使XBridge色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況;柱壓突然升高或降低也會沖動柱內填料,因此在調節(jié)流速時應該緩慢進行,在閥進樣時閥的轉動不能過緩。
  二、勿直接改變溶劑組成
  改變溶劑的組成時,應逐漸緩慢改變,特別是反相色譜中,不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?,反之亦然?br />  三、禁止反沖
  一般說來XBridge色譜柱不能反沖,只有生產者指明該柱可以反沖時,才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效。
  四、流動相方面
  1.流動相須經過超聲和0.45um濾膜除去微粒;
  2.純度要求?
  →超純水(HPLC用水);
  →緩沖液pH值2~8;
  →緩沖鹽濃度(一般10mM~20mM);
  →有機溶劑(色譜純,雜質含量盡量低)。
  提示:選擇使用適宜的流動相(尤其是pH),可避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一預柱,可使流動相在進固定相之前預先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質被溶解。
  五、樣品方面
  1.確保樣品不和填料基質相互作用;
  2.了解樣品的溶解性,若樣品的溶劑不是流動相,用流動相試溶解,防止樣品析出;
  3.樣品上樣前須經過0.45um的濾膜過濾去除微粒和雜質;
  4.避免將復雜的樣品尤其生物樣品直接注入柱內,在進樣器和XBridge色譜柱間連一保護柱。
  六、保清潔防干燥
  保存XBridge色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥。
  七、加補填料
  反相XBridge色譜柱壽命在正確使用時可達2年以上。新的XBridge色譜柱在使用一段時間后柱頂填料可能塌陷,使柱效下降,這時也可補加填料使柱效恢復。
  八、清洗
  水/乙腈(95/5)→100%乙腈→乙腈/異丙醇(75/25)→100%異丙醇→100%二氯甲烷→100%己烷
  九、再生
  30倍柱體積?正己烷→二氯甲烷→異丙醇→二氯甲烷→流動相。
  注意:若需用到二氯甲烷、己烷,使用反相流動相前需用異丙醇過渡?。
  柱子使用完后,用洗脫能力強的洗脫液沖洗XBridge色譜柱,清除保留在柱內的雜質。在進行清洗時,以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)依次沖洗,再以相反順序依次沖洗。
  十、保存
  1.存放前的處理(除去雜質、緩沖鹽);
  2.合適的存放溶劑(甲醇抑菌能力強于乙腈);
  3.避免柱床的干涸;
  4.避免機械震動(輕拿輕放);
  5.存放的溫度4~30。

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